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まず基礎知識の整理: DNAの基本3'と5'が反対方向にならぶ、どちらからでも任意の一本を転写出来る。アンカーを使うか、アンチセンスプライマで逆転写するか。転写してから、必要なコードをもった プライマをアニールする。
アニールするとき、ホモな野性株の（たとえば、プラスミド）DNAの一本に一ヶ所違う配列で
アニールしてもDNAポリメラーゼのリガーゼがligateしてくれて、例えばAの一にCが来ても、プライマ側をTに変異させることもあるだろうが、逆に宿主側をGに変異させる株も作る。